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属性 |
游离酸 (Free Acid) |
NHS酯 (NHS Ester) |
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常用名称 |
6-HEX, 6-羧基六氯荧光素 |
6-HEX, SE, 6-HEX NHS酯 |
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CAS号 |
155911-16-3 |
2129651-79-0 |
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分子式 |
C₂₁H₆Cl₆O₇ |
C₂₅H₉Cl₆NO₉ |
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分子量 |
~583 g/mol |
~680 g/mol |
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外观 |
通常为固体粉末 |
橙色固体 |
6-HEX在不同文献中报道的激发/发射波长略有不同,但大致范围如下。总体而言,它呈现明亮的橙黄色至橙红色荧光。
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参数 |
常见数值 (1) |
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最大激发波长 (Ex) |
~532 - 535 nm |
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最大发射波长 (Em) |
~556 - 559 nm |
1、单一异构体,纯度高:市售的6-HEX通常是纯化的单一6-异构体。相比混合异构体,这能确保标记产物在HPLC纯化时峰型单一,实验结果重复性更好。
2、光谱分辨清晰:其光谱与FAM(~495/520 nm)和TET(~521/536 nm)能清晰区分,是构建多重PCR或测序体系的关键。
3、光稳定性好:六氯取代的结构使其光稳定性优于传统荧光素。
1、核酸标记:这是其核心应用,广泛用于标记寡核苷酸探针和PCR引物,应用于实时荧光定量PCR (qPCR)、DNA测序和基因分型等。
2、蛋白质标记:通过其NHS酯活性形式,可共价标记抗体、多肽等蛋白质的氨基,用于免疫检测。
3、多色荧光成像:常与FAM、TET、ROX等染料组合使用,实现多重荧光检测。
1、6-HEX, SE (NHS酯):最常用的活性形式,CAS号为2129651-79-0。其NHS酯基团可直接与生物分子上的伯氨基 (-NH₂) 反应,形成稳定的共价键。
2、6-HEX 亚磷酰胺 (Phosphoramidite):用于寡核苷酸的固相合成,可在DNA链的5'末端进行精确标记。
1、储存:作为粉末,应在 -20°C 下干燥、避光保存。
2、溶解:NHS酯通常溶于无水DMSO或DMF。
3、标记反应:NHS酯与氨基的反应通常在pH 8.5左右的缓冲液(如碳酸氢钠缓冲液)中进行。