6-FAM发出明亮的绿色荧光,其具体光谱参数如下:
| 参数 | 数值 | 备注 |
|---|---|---|
| 最大激发波长 (Ex) | ~492 - 495 nm | 与488 nm的氩离子激光器完美匹配 |
| 最大发射波长 (Em) | ~517 - 520 nm | 发射峰窄且强度高 |
| 荧光量子产率 | 高 | 确保信号明亮,检测灵敏度高 |
6-FAM是分子生物学和生物化学研究中的基础工具,应用极为广泛:
1、核酸研究与检测:这是其最核心的应用。用于标记DNA/RNA寡核苷酸探针,广泛用于实时荧光定量PCR (qPCR)、DNA测序和荧光原位杂交 (FISH) 。6-FAM本身是带有羧基(-COOH)的非活化形式 。为方便标记不同生物分子,它被制成多种活性衍生物:
| 衍生物类型 | 反应基团 | 主要用途 |
|---|---|---|
| NHS酯 (NHS Ester) | 与伯胺 (-NH₂) 反应 | 最常用,用于标记蛋白质、抗体、氨基修饰的核酸等 |
| 马来酰亚胺 (Maleimide) | 与巯基 (-SH) 反应 | 特异性标记含半胱氨酸的蛋白质或肽段 |
| 亚磷酰胺 (Phosphoramidite) | 用于DNA固相合成 | 在寡核苷酸5'末端进行精准标记 |